阪崎腸桿菌16S rDNA基因檢測質粒DNA標準物質
??【編號】:GBW(E)100306 ??【產品名稱】:阪崎腸桿菌16S rDNA基因檢測質粒DNA標準物質 ??【規格】:1.5mL;62.4 ng/μL( 1.47×1010copies/μL) ??【用途】: ![]() 阪崎腸桿菌16S rDNA基因檢測質粒DNA標準物質
編號: GBW(E)100306
規格: 1.5mL離心管
標準值:62.4 ng/μL( 1.47×1010copies/μL)
不確定度:Urel=3.4%(k=2)
樣品制備
在GenBank中搜索阪崎腸桿菌的16S rDNA基因序列;對上述序列進行分析,選擇合適的序列和合適的酶切位點,并將酶切位點加至序列兩端;將處理后的序列進行全基因人工合成,并將所得全長基因分別克隆至質粒載體pUC19中,構建獲得包含目的基因序列的質粒DNA標準物質;利用大腸桿菌DH5α進行復制生產,對目標質粒DNA進行提取純化,經稀釋分裝得到質粒DNA樣品。
溯源性及定值方法
本標準物質中質粒DNA采用紫外分光光度法和高分辨電感耦合等離子體質譜法(HR-ICP-MS)進行定值。
核酸分子含有嘌呤環和嘧啶環的共軛雙鍵,其紫外可見吸收光譜在260 nm附近有一強的吸收峰,針對雙鏈DNA,樣品濃度和吸光值之間有以下關系:雙鏈DNA樣品濃度= OD260×核酸稀釋倍數×50,其中OD260為核酸在260 nm處的吸光值。用超純水做空白對照,通過測定其在260 nm處的吸光值可換算出質粒濃度。
核酸分子中,每個堿基對應一個磷原子,根據公式:含磷量P%=堿基數*磷的原子量÷DNA分子量,即可計算出四個質粒DNA標準物質的含磷量。再利用HR-ICP-MS方法檢測標準物質樣品中的磷元素含量,計算得到質粒DNA標準物質的含量。
定值過程使用滿足計量學特性要求的測量方法和計量器具,保證其溯源性。
特性量值及不確定度
保質期: 12個月
來源:計量院
類別:國標物、阪崎腸桿菌ompA基因
聲明:此對照品、標準品由【中檢計量】提供網站查詢購買服務
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