阪崎腸桿菌ITS序列檢測質粒DNA標準物質
| ??【編號】：GBW(E)100307 ??【產品名稱】：阪崎腸桿菌ITS序列檢測質粒DNA標準物質 ??【規格】：1.5mL；75.1 ng/μL( 2.19×1010copies/μL) ??【用途】：   阪崎腸桿菌ITS序列檢測質粒DNA標準物質
編號: GBW(E)100307
規格: 1.5mL離心管
標準值：75.1 ng/μL( 2.19×1010copies/μL)
不確定度: Urel=2.8%(k=2)
本標準物質中質粒DNA采用紫外分光光度法（UV）和高分辨電感耦合等離子體質譜法（HR-ICP-MS）進行定值。
樣品制備
在GenBank中搜索阪崎腸桿菌的16S～23S rDNA 間區（ITS）序列；對上述序列進行分析，選擇合適的序列和合適的酶切位點，并將酶切位點加至序列兩端；將處理后的序列進行全基因人工合成，并將所得全長基因克隆至質粒載體pUC19中，構建獲得包含目的基因序列的質粒DNA標準物質。利用大腸桿菌DH5α進行復制生產，對目標質粒DNA進行提取純化，經稀釋分裝得到質粒DNA樣品。
溯源性及定值方法
本標準物質中質粒DNA采用紫外分光光度法和高分辨電感耦合等離子體質譜法（HR-ICP-MS）進行定值。
核酸分子含有嘌呤環和嘧啶環的共軛雙鍵，其紫外可見吸收光譜在260 nm附近有一強的吸收峰，針對雙鏈DNA，樣品濃度和吸光值之間有以下關系：雙鏈DNA樣品濃度= OD260×核酸稀釋倍數×50，其中OD260為核酸在260 nm處的吸光值。用超純水做空白對照，通過測定其在260 nm處的吸光值可換算出質粒濃度。
核酸分子中，每個堿基對應一個磷原子，根據公式：含磷量P%=堿基數*磷的原子量÷DNA分子量，即可計算出四個質粒DNA標準物質的含磷量。再利用HR-ICP-MS方法檢測標準物質樣品中的磷元素含量，計算得到質粒DNA標準物質的含量。
定值過程使用滿足計量學特性要求的測量方法和計量器具，保證其溯源性。
三、特性量值及不確定度
保質期: 12個月
來源：計量院
類別：國標物、阪崎腸桿菌ompA基因
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