阪崎腸桿菌ITS序列檢測質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
編號: GBW(E)100307
規(guī)格: 1.5mL離心管
標(biāo)準(zhǔn)值：75.1 ng/μL( 2.19×1010copies/μL)
不確定度: Urel=2.8%(k=2)
本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中質(zhì)粒DNA采用紫外分光光度法（UV）和高分辨電感耦合等離子體質(zhì)譜法（HR-ICP-MS）進(jìn)行定值。
樣品制備
在GenBank中搜索阪崎腸桿菌的16S～23S rDNA 間區(qū)（ITS）序列；對上述序列進(jìn)行分析，選擇合適的序列和合適的酶切位點(diǎn)，并將酶切位點(diǎn)加至序列兩端；將處理后的序列進(jìn)行全基因人工合成，并將所得全長基因克隆至質(zhì)粒載體pUC19中，構(gòu)建獲得包含目的基因序列的質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。利用大腸桿菌DH5α進(jìn)行復(fù)制生產(chǎn)，對目標(biāo)質(zhì)粒DNA進(jìn)行提取純化，經(jīng)稀釋分裝得到質(zhì)粒DNA樣品。
溯源性及定值方法
本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中質(zhì)粒DNA采用紫外分光光度法和高分辨電感耦合等離子體質(zhì)譜法（HR-ICP-MS）進(jìn)行定值。
核酸分子含有嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵，其紫外可見吸收光譜在260 nm附近有一強(qiáng)的吸收峰，針對雙鏈DNA，樣品濃度和吸光值之間有以下關(guān)系：雙鏈DNA樣品濃度= OD260×核酸稀釋倍數(shù)×50，其中OD260為核酸在260 nm處的吸光值。用超純水做空白對照，通過測定其在260 nm處的吸光值可換算出質(zhì)粒濃度。
核酸分子中，每個堿基對應(yīng)一個磷原子，根據(jù)公式：含磷量P%=堿基數(shù)*磷的原子量÷DNA分子量，即可計(jì)算出四個質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的含磷量。再利用HR-ICP-MS方法檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品中的磷元素含量，計(jì)算得到質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的含量。
定值過程使用滿足計(jì)量學(xué)特性要求的測量方法和計(jì)量器具，保證其溯源性。
三、特性量值及不確定度
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標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)名稱 |
標(biāo)準(zhǔn)值 |
相對擴(kuò)展不確定度 |
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（k=2） |
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阪崎腸桿菌ITS序列檢測質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) |
[濃度] |
2.80% |
保質(zhì)期: 12個月
來源：計(jì)量院
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