體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)陰性對照品
Negative control for in vitro cytotoxicity
【類別】醫(yī)療器械標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
【批號】350025-202401
【性狀】白色固體粒料
【用途】用于醫(yī)療產(chǎn)品中細(xì)胞毒性體系控制與驗(yàn)證
【組成】聚乙烯
【細(xì)胞存活率】使用本品進(jìn)行體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)（MTT 法），細(xì)胞存
活率范圍為：大于 70%
【使用方法和要求】
本品使用常規(guī)培養(yǎng)基（10%胎牛血清、2% 4mM 谷氨酰胺、88%不含
酚紅 MEM 培養(yǎng)基, 配制好的完全培養(yǎng)基在 4℃條件下貯存不宜超過兩
周）進(jìn)行浸提。浸提方法如下：無菌操作，取 1g 本品放置于容器中，
按照 0.2g/mL 浸提比例加入浸提介質(zhì)完全培養(yǎng)基，豎直放置振蕩，
120rpm,37℃條件下震蕩浸提 24h，取浸提液用于試驗(yàn)。完全培養(yǎng)基
置于同樣的容器中，120rpm,37℃條件下震蕩浸提 24h，用作空白對
照。
體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)采用 MTT 法進(jìn)行檢測：取狀態(tài)良好的 L929 細(xì)
胞，消化離心，配制成 1×10 5
/mL 細(xì)胞懸液接種于 96 孔培養(yǎng)板，每組應(yīng)設(shè)立多個復(fù)孔，每孔接種 100μL 細(xì)胞懸液，置 37℃、5%二氧化
碳的 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24h。棄去原培養(yǎng)液，每孔加入 100μL 浸提液，
于 CO 2 培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。24h 后，放置于顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。棄
去孔內(nèi)液體，每孔加入 50μL 1mg/mL 的無菌 MTT 溶液（MTT 注意現(xiàn)用
現(xiàn)配），繼續(xù)培養(yǎng) 2h 后棄去孔內(nèi)液體，加入 100μL 異丙醇，振蕩混勻，
在酶標(biāo)儀 570nm 和 650nm 波長下測定吸光度，計算細(xì)胞存活率。細(xì)胞
存活率計算公式如下：