34 種細(xì)菌和真菌感染多重核酸檢測(cè)試劑國(guó)家參考品
National Reference Panel for Multiplex Nucleic Acid Assay for
Identification of Infection of 34 Microorganisms
【類別】體外診斷試劑參考品
【批號(hào)】370026-201801
【性狀】液體
【用途】本參考品為首批研制，參考品原料系 34 種可導(dǎo)致中樞神經(jīng)
系統(tǒng)、血液、呼吸道、腸道以及生殖道感染的致病性細(xì)菌或真菌（以
下簡(jiǎn)稱“病原菌”，不包括支原體和衣原體）的培養(yǎng)物。本參考品適
用于對(duì)人體樣本或其培養(yǎng)物進(jìn)行單次檢測(cè)可報(bào)告 3 種及以上病原菌
檢測(cè)結(jié)果的多重核酸檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法、恒溫
擴(kuò)增法、熔解曲線法以及靶向擴(kuò)增二代測(cè)序法)部分性能要求的質(zhì)量
控制和評(píng)價(jià)：陽(yáng)性參考品符合率、陰性參考品符合率、重復(fù)性及最低
檢出限。
【組成和規(guī)格】本參考品由 7 支混合參考品組成。
類型 編號(hào) 規(guī)格 支數(shù)
混合參考品
M1 0.2ml/支 1
M2 0.2ml/支 1
M3 0.2ml/支 1
M4 0.2ml/支 1
M5 0.2ml/支 1
M6 0.2ml/支 1
M7 0.2ml/支 1
注：本參考品規(guī)格均不少于 0.2ml/支。
混合參考品 M1～M7 詳細(xì)組成見(jiàn)下表。
編號(hào) 細(xì)菌和真菌 細(xì)菌或真菌 濃度
編號(hào) 細(xì)菌和真菌
及耐藥基因
細(xì)菌和真菌
英文
濃度
CFU/ml
核酸濃度
copies/ml
M1
屎腸球菌 [vanA]
Enterococcus faecium 2×106 5.5×10 6
肺炎鏈球菌
Streptococcus pneumoniae 1×106 3.1×10 6
粘質(zhì)沙雷氏菌
Serratia marcescens 1×107 7.4×10 6
大腸埃希氏菌*
Escherichia coli 2×106 3.4×10 6
表皮葡萄球菌
Staphylococcus epidermidis 2×106 2.3×10 6
M2
鮑曼不動(dòng)桿菌
Acinetobacter baumannii 2×106 3.8×10 6
肺炎克雷伯菌 [KPC]
Klebsiella pneumoniae 2×106 3.7×10 6
熱帶念珠菌
Candida tropicalis 1×105 6.2×10 5
克柔念珠菌
Candida krusei 1×105 1.3×10 6
緩癥鏈球菌
Streptococcus mitis 2×106 7.9×10 6
M3
糞腸球菌 [vanB]
Enterococcus faecalis 2×106 2.9×10 6
白色念珠菌
Candida albicans 1×105 5.1×10 5
產(chǎn)酸克雷伯菌
Klebsiella oxytoca 2×106 2.2×10 6
化膿鏈球菌
Streptococcus pyogenes 2×106 4.1×10 6
M4
流感嗜血桿菌
Haemophilus influenzae 1×106 8.7×10 5
光滑念珠菌
Candida glabrata 1×105 2.3×10 6
金黃色葡萄球菌 [mecA]
Staphylococcus au eus 5×106 2.6×10 7
奇異變形桿菌
Proteus mirabilis 1×106 1.9×10 6
無(wú)乳鏈球菌
Streptococcus agalactiae 5×106 1.0×10 7
M5
單核細(xì)胞增多性李斯特菌
Listeria monocytogenes 1×107 7.7×10 6
陰溝腸桿菌
Enterobacter cloacae 2×106 3.5×10 6
銅綠假單胞菌
Pseudomonas aeruginosa 2×106 4.4×10 6
近平滑念珠菌
Candida parapsilosis 1×105 3.7×10 5
腦膜炎奈瑟菌
Neisseria meningitidis 2×106
5.0×10 6
M6
滕黃微球菌
Micrococcus luteus 2×106 1.9×10 6
馬紅球菌
Rhodococcus equi 2×106 2.1×10 6
格氏李斯特菌
Listeria grayi 2×106
5.3×10 6
瓊氏不動(dòng)桿菌
Acinetobacter junii 2×106 2.7×10 6
副流感嗜血桿菌
Haemophilus parainfluenzae 1×107 1.1×10 7
M7 干燥奈瑟氏菌
Neisseria sicca 2×106 3.6×10
熒光假單胞菌
Pseudomonas fluorescens 2×106 3.2×10 6
嗜水氣單胞菌
Aeromonoas hydrophila 2×106 9.4×10 5
葡萄牙念珠菌
Candida lusitaniae 1×105 1.7×10 6
嗜肺軍團(tuán)菌
Legionella pneumophila 2×106 3.4×10
注：*本參考品中的大腸埃希氏菌屬于 O157:H7 血清型。
vanA/B，萬(wàn)
古霉素耐藥基因 A/B；
KPC，碳青酶烯耐藥基因；
mecA，甲氧西林耐
藥基因。
【使用方法和要求】
1.操作步驟
參考品復(fù)溶及稀釋：所有參考品平衡至室溫后，加入 0.5 ml 無(wú)
核酸酶無(wú)菌水或試劑盒說(shuō)明書(shū)中規(guī)定的稀釋基質(zhì)復(fù)溶，并按適當(dāng)比例
進(jìn)行稀釋后使用，稀釋比例參考“2.檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)”；
核酸提取：所有參考品均需進(jìn)行核酸提取，使用試劑盒說(shuō)明書(shū)中
推薦的核酸提取試劑盒操作，用來(lái)評(píng)價(jià)重復(fù)性的參考品應(yīng)平行提取
10 次，其余參考品評(píng)價(jià) 1 次；
檢測(cè)及判定：依據(jù)本企業(yè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)和判定。
2.檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)
1）陽(yáng)性參考品符合率
檢測(cè)經(jīng)稀釋（終濃度不低于 1.0×10
5 CFU/ml）的參考品 M1～
M7，在試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)的病原菌均應(yīng)檢出，且與已知型別相
符；
2）陰性參考品符合率
檢測(cè)經(jīng)稀釋（終濃度不低于 1.0×10
5 CFU/ml）的參考品 M1～
M7，不在試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)的病原菌均不應(yīng)檢出；
3）重復(fù)性
檢測(cè)稀釋至低濃度（不高于試劑盒宣稱的最低檢出限的 5
倍）的參考品 M1～M7，分別重復(fù)檢測(cè) 10 次，在試劑盒檢測(cè)范圍
內(nèi)的病原菌均應(yīng)檢出，且與已知型別相符；
4）最低檢出限
檢測(cè)經(jīng) 10 倍梯度稀釋至試劑盒宣稱的最低檢出限以下的參
考品 M1～M7，終濃度為試劑盒宣稱的最低檢出限以上時(shí)，在試
劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)的病原菌均應(yīng)檢出，且與已知型別相符。
【包裝】西林瓶
【貯藏】長(zhǎng)期保存應(yīng)置于-20℃以下。
【注意事項(xiàng)】
1.本參考品短時(shí)間內(nèi)（如不超過(guò) 5 天）可 2-8℃及更低溫度條件下運(yùn)
輸。復(fù)溶后建議盡快使用并避免 3 次以上反復(fù)凍溶。
2.對(duì)于在試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)但本參考品未覆蓋的病原菌，企業(yè)應(yīng)使用
其他適用的國(guó)家參考品或企業(yè)參考品對(duì)試劑盒進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。
3.使用本參考品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)時(shí)如果發(fā)生非特異反應(yīng)，在企業(yè)充分證
明該非特異反應(yīng)不影響試劑盒主要性能，且在試劑盒說(shuō)明書(shū)中顯著位
置予以說(shuō)明的前提下，可以接受。
4.本參考品不適用于單次檢測(cè)可報(bào)告 1 種或 2 種病原菌的試劑盒；不
適用于單次檢測(cè)可報(bào)告 1 種或 2 種病原菌的多個(gè)靶基因的試劑盒；不
適用于單次檢測(cè)可報(bào)告 1 種或 2 種病原菌的多個(gè)型別（基因型或血清
型）的試劑盒。
5.本參考品雖經(jīng)滅活處理，但在使用過(guò)程中仍應(yīng)按照傳染性物質(zhì)進(jìn)行
處理，操作應(yīng)按實(shí)驗(yàn)室安全管理?xiàng)l例執(zhí)行。
6.細(xì)菌和真菌的濃度單位菌落形成單位每毫升（colony forming unit
per milliliter，CFU/ml），應(yīng)用梯度稀釋培養(yǎng)法測(cè)定；核酸濃度單
位為拷貝每毫升（copies per milliliter，copies/ml），應(yīng)用數(shù)字
PCR 法測(cè)定。