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查詢時(shí)請(qǐng)注意選擇相應(yīng)的產(chǎn)品編號(hào)

		固體和液體食品中大腸菌群檢測(cè)方法

　　固體進(jìn)入無(wú)菌室步驟：．進(jìn)入無(wú)菌室前應(yīng)打開紫光燈進(jìn)行滅菌，時(shí)間為0。5—1小時(shí)。2．關(guān)燈后0?5小時(shí)后放可進(jìn)入。3．進(jìn)入更衣間更換衣服，佩帶口罩、帽子、鞋套

　　實(shí)驗(yàn)步驟：1，進(jìn)入無(wú)菌室后，先把酒精燈點(diǎn)燃，然后在用酒精棉進(jìn)行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脫脂棉中制成）2，準(zhǔn)備雙料管3根，單料管6根，培養(yǎng)皿7個(gè)。3，直接從原液中吸取10ml放入雙料管，（3根每根各10ml）4，再吸取原液1ml放入單料管中（3根每根各1ml）5，再吸取原液1ml放入培養(yǎng)皿中（2個(gè)培養(yǎng)皿各1ml）6，再吸取原液1ml放入鹽水管中制成－1梯度的樣液7，更換一根吸管，從－1梯度的樣液吸取1ml樣液放入單料管中（3根每根各1ml）8，再吸?。?梯度樣液1ml放入培養(yǎng)皿中（2個(gè)培養(yǎng)皿各1ml）9，再把每個(gè)培養(yǎng)皿中到入營(yíng)養(yǎng)瓊脂平鋪底部搖允（注另作3個(gè)培養(yǎng)皿：空氣空白，把培養(yǎng)皿打開十分鐘倒入營(yíng)養(yǎng)瓊脂平鋪底部搖勻。瓊脂空白，把培養(yǎng)皿中倒入營(yíng)養(yǎng)瓊脂平鋪底部搖勻。鹽水空白，吸1ml生理鹽水放入培養(yǎng)皿中，倒入營(yíng)養(yǎng)瓊脂平鋪底部搖勻。）10，把全部作好的放入培養(yǎng)箱中，溫度36C＋－1×C，大腸24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培養(yǎng)皿中的瓊脂凝固后反轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)放入培養(yǎng)箱中。11，梯度：－1梯度為1ml原液加入9ml生理鹽水配成－2梯度為1ml－1梯度樣液加入9ml生理鹽水配成－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一樣。12，如果大腸初發(fā)酵產(chǎn)生氣泡，用接種筆沾一個(gè)產(chǎn)氣的液在伊紅美蘭平板上畫之字形然后放入培養(yǎng)箱中36C，24H＋－2H 。（接種筆在每次使用前必須在酒精燈上消毒。所畫之形不能劃破伊紅美蘭瓊脂表面）。13，取出后在用接種筆在伊紅美蘭平板之字形上挑菌，放入乳糖復(fù)發(fā)酵管中，然后再培養(yǎng)36C＋－1C，24H＋＋－2H。。14，再在伊紅美蘭平板之字形上挑菌，放到載玻片上作鏡檢。（方法見標(biāo)準(zhǔn)）。15，只有鏡檢成紫紅色和乳糖復(fù)發(fā)酵管產(chǎn)氣同時(shí)成立的情況下，才能斷定這根管是不合格。。16，清洗消毒這根試管前必須進(jìn)行消毒霉菌，121C，0。5小時(shí)同時(shí)不能放氣。

　　水中大腸菌群的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)材料和用具

　　復(fù)紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基)、乳糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基、乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、三倍濃乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基(EMB 培養(yǎng)基)。

　　微孔濾膜(孔徑0.45?m)、濾器(容量500mL)、抽氣設(shè)備、鑷子、發(fā)酵用試管、杜氏小管、培養(yǎng)皿、刻度吸管或移液管、接種環(huán)、酒精燈。

　　操作步驟

　　(一)水樣的采集：1．自來(lái)水將自來(lái)水龍頭用火焰燒灼3min滅菌，再擰開水龍頭流水5min，以排除管道內(nèi)積存的死水，隨后用已滅菌的三角瓶接取水樣，以供檢測(cè)。2．池水、河水或湖水將無(wú)菌的帶玻塞的小口瓶浸入距水面10～15cm深的水層中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中裝滿后，蓋好瓶塞，取出后立即進(jìn)行檢測(cè)，或臨時(shí)存于冰箱，但不能超過(guò)24h。

　　(二)濾膜法檢測(cè)大腸菌群：l．用無(wú)菌鑷子將一無(wú)菌濾膜置于濾器的承受器當(dāng)中，將過(guò)濾杯裝于濾膜承受器上，旋緊，使接口處能密封，將真空泵與濾器下部的抽氣口連接(圖26-1)。2．加水樣100mL于濾杯中，啟動(dòng)抽真空系統(tǒng)，使水通過(guò)濾膜流到下部，水中的菌細(xì)胞被截留在濾膜上。水樣用量可適當(dāng)增減使獲得菌落適量。3．用無(wú)菌鑷子小心將截留有細(xì)菌的濾膜取出，平移貼于復(fù)紅亞硫酸鈉固體培養(yǎng)基上(注意無(wú)菌操作，濾膜與培養(yǎng)基間貼緊，無(wú)氣泡)，37℃培養(yǎng)16～l8h。挑選深紅色或紫紅色、帶有或不帶金屬光澤的菌落，或淡紅色、中心色較深的菌落進(jìn)行涂片和革蘭氏染色觀察。4．經(jīng)染色證實(shí)為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌者，再接種在乳糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)6～8h后觀察，產(chǎn)氣者證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性。培養(yǎng)中應(yīng)及時(shí)觀察，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則氣泡可能消失。

　　5．結(jié)果計(jì)算：水樣中總大腸菌群數(shù)/個(gè)?L-1=（濾膜生長(zhǎng)的菌落數(shù)/過(guò)濾水樣量/mL）×100（濾膜上菌落數(shù)以20～60個(gè)/片較為適宜）

　　多管發(fā)酵法檢測(cè)大腸菌群

　　1．取5支裝有3倍濃乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的初發(fā)酵管，每管分別加入水樣10mL。另取5支裝有乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的初發(fā)酵管，每管分別加入水樣lmL。再取5支裝有乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的初發(fā)酵管，每管分別加入按1：10稀釋的水樣lmL（即相當(dāng)于原水樣0.1mL），均貼好標(biāo)簽。此即為15管法，接種待測(cè)水樣量共計(jì)55.5mL。各管搖勻后在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h。

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