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| 熒光分光光度計的使用方法、功能用途與分類 | |||
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熒光分光光度計基本原理
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。 物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子 吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光.
不同物質(zhì)由于分子 結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進行物質(zhì)的鑒定。
在溶液中，當熒光物質(zhì)的濃度較低時,其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標準曲線法進行。
熒光分光光度計 基本結(jié)構(gòu)
1. 光源：
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm 范圍內(nèi)強度幾乎相等，故較常用。
2.激發(fā)單色器：
置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。
3.發(fā)射單色器：
置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
4. 樣品室：
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時，光源與檢測器成直角安排;測量固體時，光源與檢測器成銳角安排。
5. 檢測器：
一般用光電管或光電倍增管作檢測器。可將光信號放大并轉(zhuǎn)為電信號。
熒光分光光度計功能特點
1. 熒光發(fā)射光譜
選擇某一固定波長的光激發(fā)樣品，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，即得熒光發(fā)射光譜。
2. 熒光激發(fā)光譜
選定某一熒光發(fā)射波長記錄熒光發(fā)射強度作為激發(fā)光波長的函數(shù)，即得熒光激發(fā)光譜。
3.時間分辨技術(shù);
可用于對混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進行分辨并分別測量。
時間分辨熒光測定公式如下：
P(t) = P0 EXP (-t /τ)
式中P(t)：擬合指數(shù)函數(shù)
P0：強度取值
EXP：指數(shù)運算符
t：時間取值
τ：熒光平均時間壽命
熒光分光光度計產(chǎn)品應用
對經(jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)成份分析，可應用于生物化學、生物醫(yī)學、環(huán)境化工等部門。
熒光分光光度計分類
熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點，可以廣泛應用于生命科學、醫(yī)學、藥學和藥理學、有機和無機化學等領(lǐng)域。
熒光分光光度計的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計，自動記錄式熒光分光光度計，計算機控制式熒光分光光度計.
光分光光度計三個階段;熒光分光光度計還可分為單光束式熒光分光光度計和雙光束式熒光分光光度計兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計，配有壽命和相分辯測定的熒光分光光度計等。
經(jīng)過上述的逐步分析闡述，我們了解熒光分光光度計的工作原理就不難了。最后再提供下小意見，當初我們實驗室用的是奧林巴斯的熒光分光光度計。
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