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		血清學(xué)的檢測(cè)三種類別方法簡介

　　血清學(xué)試驗(yàn)由于其特異性強(qiáng)、靈敏度高、方法簡便，應(yīng)用極為廣泛。目前，凡具有抗原性的物質(zhì)，在沒有其他更簡便的方法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，幾乎都可以用血清學(xué)試驗(yàn)方法來檢查。近年來在環(huán)境微生物檢測(cè)中，除常用的凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、中和試驗(yàn)等方法外，瓊脂擴(kuò)散法、免疫電泳法、免疫熒光技術(shù)和酶聯(lián)免疫技術(shù)等方法的應(yīng)用也日趨廣泛。

　　血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)抗原或抗體的基本方法，可歸納為兩種類型，即用已知的抗體(如診斷血清)檢測(cè)未知抗原、或用已知的抗原(如診斷菌液)檢測(cè)未知抗體。

　　抗原抗體之間，有的在二者發(fā)生特異性結(jié)合之后，在一定條件的影響下，即可出現(xiàn)可見反應(yīng)，這種試驗(yàn)方法稱為直接試驗(yàn)法，如常用的凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)等；有的在二者發(fā)生特異性結(jié)合之后，并不直接表現(xiàn)為可見的反應(yīng)，或反應(yīng)不夠靈敏，需借助指示系統(tǒng)或載體使其表現(xiàn)為可見反應(yīng)，這種試驗(yàn)方法稱為間接試驗(yàn)法。例如補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，利用補(bǔ)體、紅細(xì)胞及溶血素作為指示系統(tǒng)，觀察溶血現(xiàn)象的發(fā)生與否；又如間接凝集試驗(yàn)，將抗原或抗體吸附在載體如膠乳、紅細(xì)胞等顆粒的表面，使抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)通過載體發(fā)生的凝集表現(xiàn)出來。

　　近年來，迅速發(fā)展的免疫電泳和標(biāo)記技術(shù)，使血清學(xué)試驗(yàn)方法提高到新的水平。免疫電泳法將電泳技術(shù)和沉淀反應(yīng)相結(jié)合，提高了試驗(yàn)的特異性和靈敏度，應(yīng)用熒光色素、酶及放射性同位素等與抗體(或抗原)結(jié)合來檢測(cè)抗原(或抗體)。

　　經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)分三種類別：凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。

　　一、凝集反應(yīng)：顆粒性抗原（細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)（Agglutination reaction）。其中的抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。在該反應(yīng)中，因?yàn)閱挝惑w積抗體量大，做定量實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)稀釋抗體。

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　　顆粒性抗原與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的反應(yīng)，稱為直接凝集反應(yīng)(Direct www.atcc360.comagglution reaction)。

　　a.玻片凝集法。是一種常規(guī)的定性試驗(yàn)方法。原理是用已知抗體來檢測(cè)未知抗原。常用于鑒定菌種、血型。如將含有痢疾桿菌抗體的血清與待檢菌液各一滴，在玻片上混勻，數(shù)分種后若出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，即陽性反應(yīng)，證明該菌是痢疾桿菌。此法快速、簡便，但不能進(jìn)行定量測(cè)定。

　　b.試管凝集法。是一種定量試驗(yàn)方法。多用已知抗原來檢測(cè)血清中有無相應(yīng)抗體及其含量。常用于協(xié)助診斷某些傳染病及進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。如肥達(dá)氏反應(yīng)就是診斷傷寒、付傷寒的試管凝集試驗(yàn)。因?yàn)橐獪y(cè)定抗體的含量，故將待檢查的血清用等滲鹽水倍比稀釋成不同濃度，然后加入等量抗原，37℃或56℃，2~4小時(shí)觀察，血清最高稀釋度仍有明顯凝集現(xiàn)象的，為該抗血清的凝集效價(jià)。

　　２）間接凝集反應(yīng)

　　將可溶性抗原（抗體）先吸附在一種與免疫無關(guān)的，顆粒狀微球表面，然后與相應(yīng)抗體（抗原）作用，在有電解質(zhì)存在的條件下，即可發(fā)生凝集，稱為間接凝集反應(yīng)(Indirect agglutination)。由于載體增大了可溶性抗原的反應(yīng)面積。當(dāng)載體上有少量抗原與抗體結(jié)合。就出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng)，敏感性很高。

　　二、沉淀反應(yīng)：可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適量電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時(shí)間，形成肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)（Precipitation）。反應(yīng)中的抗原稱為沉淀原，抗體為沉淀素。由于在單位體積內(nèi)抗原量大，為了不使抗原過剩，故應(yīng)稀釋抗原，并以抗原的稀釋度作為沉淀反應(yīng)的效價(jià)。

　?。保┉h(huán)狀沉淀反應(yīng)：是一種定性試驗(yàn)方法，可用已知抗體檢測(cè)未知抗原。將已知抗體注入特制小試管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原與抗體對(duì)應(yīng)，則在兩液界面出現(xiàn)白色的沉淀圓環(huán)。　?。玻┬鯛畛恋矸磻?yīng)：將已知抗原與抗體在試管（如凹玻片）內(nèi)混勻，如抗原抗體對(duì)應(yīng)，而又二者比例適當(dāng)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)肉眼可見的絮狀沉淀，此為陽性反應(yīng)。

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