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| 生物體內基因排布與外在性狀表示的規律的技術 | |||
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對基因組進行PCR擴增，擴增產物通過瓊脂糖凝膠電泳或PA GE電泳檢測，研究DNA 多態性。由于隨機引fel較低的復性溫下能與基因組DM非特異性的結合，當相鄰兩個引物間的DNA 小于2000bp時，就能夠得到擴增產物。與RFLP相比，RA PD具有很多優點。1不需要了解研究對象基因組的任何序列，只需很少純度不高的模板，就可以檢測出大量的信息。2無需專門設計RA W反應引物，隨機設計長度為8-10個堿基的核苷酸序列就可應用。3操作簡便，不涉及分子雜交、放射自顯影等技術。4需要很少的DNA 樣本。5不受環境、發育、數量性狀遺傳等的影響，能夠客觀地提示供試材料之間DNA 差別?？梢詸z測出RFLP標志不能檢測的重復順序區。當然RA PD技術有一定的局限性，呈顯性遺傳標記（極少數共顯性）不能有效區分雜合子和純合子。易受反應條件的影響，某些情況下，重復性較差，可靠性較低，對反應的微小變化十分敏感。如聚合酶的來源，DNA 不同提取方法，Mg2+離子濃度等都需要嚴格控制_隨機擴增多態 DNA randomliamplifiwww.atcc360.compolymorphDNA ,RA PD美國學者William和Welsh于1990年首先提出的該技術是通過分析DNA PCR產物的多態性來推測生物體內基因排布與外在性狀表示的規律的技術。RA PD技術是以8-lObp隨機寡核苷酸片段作為引物。
因而用一組人為設計的核苷酸作為引物，通過PCR隨機擴增可發生物種特異性的DNA 帶譜。根據隨機引物長度將這種技術分為AP-PCRarbitratiprimePCR,隨機擴增DNA 多態性分析(randomamplifipolymorphDNA RA PD一種建立基因組DNA 指紋圖譜多態性分析技術。其理論依據是不同的基因組中與隨意引物匹配的堿基序列的位點和數目可能不同。引物長度為020個堿基)RA PDrandornamplifipolymorphDNA 引物長度為10個堿基)和DA FDNA ampliffingerprint引物長度為510個堿基)三者獲得的DNA 指紋圖譜的復雜水平不同，引物越長，獲得的指紋圖譜越簡單。
隨機擴增多態性DNA標記（RandomamplificationpolymorphismDNA,簡稱RAPD標記）多個等位基因同時存在于一個基因座稱為遺傳多態性（genetic polymorphism）。
遺傳多態性一般是建立遺傳分子標記來分析的。主要有以下幾種方法：限制性片段長度多態性(RFLP)標記：這種多態性是由于限制性內切酶酶切位點或位點間DNA區段發生突變引起的。隨機擴增多態性(RAPD)標記：RAPD是通過短的隨機引物擴增個體基因組DNA體現多態性 擴增片段長度(AFLP)多態性標記：AFLP是將PCR技術與RFLP結合的一種方法，通過對基因組DNA酶切片段的選擇性擴增來檢測DNA酶切片段長度的多態性。 微衛星多態性標記(SSRP)：基于PCR技術的DNA標記，多態性是由同一座位上
的串聯單元數量的不同而產生的。 單鏈構象多態性標記(SSCP)單核苷酸多態性標記(SNP)：將被測DNA片段與高密度DNA探針(中部單核苷酸替代探針)微陣列雜交，一次性快速顯示被測序列的單核苷酸多態性，并通過計算機分析雜交類型，最終顯示SNP結果。
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